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PCR實驗室的四個區(qū)域應注意正壓負壓控制

更新時間:2023-01-04

  PCR實驗室又稱基因擴增實驗室,其特點是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,廣泛應用于生物學各個領域。例如:艾滋病檢測、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA指紋、個體識別、親子鑒定及法醫(yī)物證、動植物檢疫,動物及其衍生產品檢測,動物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測,轉基因作物與轉基因微生物檢測等。

  原則上分為四個區(qū)域:試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)。

  PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設有專用走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。

  PCR實驗室區(qū)域的設置并不是一成不變的,以下幾種情況需要說明:

  1.如果樣本在擴增之前需要粉碎處理,則需要增加一個區(qū)域用于樣品的粉碎。

  2.如果采用實時熒光PCR法,則擴增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個區(qū)。

  3.如果采用全自動化PCR分析儀,則標本制備區(qū)、擴增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個區(qū)。

  四個區(qū)域注意正壓負壓的控制:

  1.試劑準備區(qū):

  主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,并在本區(qū)內制備成所需的試劑。本區(qū)主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。

  對于氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。

  2.樣品制備區(qū):

  主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。

  本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

  3.擴增區(qū):

  該區(qū)域的功能是DNA擴增和擴增片段的測定。此外,反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液和已制備的DNA模板(來自標本制備區(qū))的加入等也可在本區(qū)內進行。對于氣流壓力的控制,相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。

  該區(qū)域的設備主要是核酸擴增熱循環(huán)儀、加樣器、超凈臺等。其中熱循環(huán)儀的電源應專用,并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS,以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響主要進行DNA擴增。

  本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。

  4.擴增產物分析區(qū):

  擴增產物的測定。本區(qū)主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。

  本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。


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